蛋白转印技术概述 - Western Blot技术是生命科学研究中用于识别特定蛋白质的关键方法 蛋白转印作为该技术的核心环节 直接影响实验结果的可靠性[1] - 常见的蛋白转印问题包括条带信号弱 背景杂讯高 以及条带形态不规则 这些问题会导致实验重复性差 样本试剂浪费 甚至实验结果误判[3][4] - 蛋白转印成功的关键在于细节把控 样本和验证过的抗体比转膜试剂和设备更宝贵[4] 转膜方式技术对比 - 湿式转印适用于各种分子量蛋白和复杂样品 但耗时较长（至少1小时） 需要使用含甲醇的有毒缓冲液 且转印过程会产生热量需低温控制[6][7] - 半干式转印将转印时间缩短至10分钟 但对实验条件敏感 对大于100 kDa的高分子量蛋白和低分子量蛋白转移效率较差 需要更多预实验优化参数[10][11] - 干式转印无需缓冲液 操作快速 但依赖专用转印模组 耗材成本较高 对极端分子量蛋白转移效果差 受蛋白性质影响更大[14][15] 转膜操作关键要素 - 转膜方式选择需根据蛋白分子量：湿转适用大中小分子量 半干转适用<100 kDa中小分子蛋白 干转需提前验证极端分子量蛋白适配性[18] - 电泳后需用转膜缓冲液平衡凝胶 移除残留SDS和Tris-甘氨酸 避免凝胶暴露空气超过5分钟以防干燥收缩[19] - 转印膜选择：NC膜蛋白结合能力80-100μg/cm² 较脆适合中高丰度蛋白 PVDF膜结合能力170-200μg/cm² 需100%甲醇活化1-2分钟 更适合低丰度蛋白[20] - 转膜缓冲液需使用新鲜配制 避免重复使用 核心组分包括Tris-HCl维持pH 甘氨酸防止凝胶溶胀 甲醇浓度10%-20% SDS提高大分子蛋白转印效率[21][22] - 转印三明治组装需确保各层无气泡 凝胶与膜边缘对齐 仪器参数需根据蛋白分子量调整[23] 金斯瑞eBlot™快速湿转仪解决方案 - eBlot™快速湿转仪结合了传统湿转稳定性和半干转快速高效优势 在5-15分钟内完成蛋白转印[24] - 该仪器成功转印了从21 kDa到370 kDa不同分子量的蛋白 包括RPL17(21 kDa) β-actin(42 kDa) EGFR(175 kDa)和ATM(370 kDa)[25] - 公司推出以旧换新活动 实验室可用闲置干转仪 半干转仪换购 享受专属折扣和免费测试服务 活动时间至2025年12月30日[26][27][28] - 同时开展互动有礼活动 分享转膜踩坑经历可获精美礼品 活动时间至2025年9月30日[28][30]